Contexte La transmission d’Entamoeba histolytica se produit généralement par excrétion fécale de kystes suivie d’ingestion orale d’aliments ou d’eau contaminés. Cependant, la transmission fécale-orale peut survenir au sein des ménages et des établissements de soins de longue durée et la transmission sexuelle chez les hommes ayant des rapports sexuels. Les clusters liés de l’infection à E histolytica sont rares dans les pays industrialisés Nous rapportons un tel groupe sexuellement lié dans CanadaMethods Un cas index impliquant une jeune femme avec un abcès hépatique amibien a conduit à une enquête épidémiologique des contacts sexuels Analyse sérologique anti-amibienne, examens d’échantillons de selles, Une analyse immuno-enzymatique a été réalisée pour l’antigène des selles spécifique à E histolytica. Le génotypage et l’analyse phylogénétique ont été effectués sur des isolats de selles. En traçant les contacts sexuels liés au cas index, nous avons découvert un groupe de cas d’amibiase avec abcès du foie Oral-ana le sexe était commun dans le groupe; Les souches femelles étaient bisexuées ou homosexuelles. La souche épidémique a été génotypée et l’analyse par grappes a révélé que cette souche virulente différait considérablement des isolats E histolytica asymptomatiques ou diarrhéiques. Les clonages peuvent être transmis par l’activité hétérosexuelle ainsi que par l’activité homosexuelle des mâles et des femelles. être conseillé sur la transmission sexuelle possible

Entamoeba histolytica et la variante morphologiquement identique avirulente Entamoeba dispar sont répandues dans les pays en développement, avec des taux de prévalence de% -% La transmission se produit généralement par excrétion fécale de kystes suivie d’ingestion orale d’aliments ou d’eau contaminés. La prévalence des infections à E histolytica et à E dispar chez les hommes ayant des rapports sexuels avec des hommes HSH est renforcée par la présence de partenaires multiples et par le système immunitaire. déficience chez les personnes infectées par le virus de l’immunodéficience humaine VIH Outre les situations ci-dessus, E histolytica est rarement transmise dans les pays industrialisés, et les épidémies sont très rares dans ces endroits. La maladie invasive est associée à la production d’anticorps anti-amibiens. grappe d’une forme hautement virulente d’E histolytica transmise au Canada; la transmission a été conduite par l’activité homosexuelle hétérosexuelle et féminine

Méthodes

Tous les spécimens de selles ont été traités pour la microscopie en utilisant la procédure de concentration formol-éther. Six patients ont chacun des échantillons de selles examinés pour les ovules et les parasites Tableau En bref, pour chaque échantillon, les selles ont été soigneusement mélangées et suspendues au formol acétate de sodium. Les suspensions ont été sédimentées à -g pendant min et ont été lavées à l’eau saline. Les culots ont été chacun remis en suspension dans des ml de formol tamponné, puis des mL de Chaque échantillon a été granulé à – min. La couche de solvant et le surnageant ont ensuite été décantés. Une préparation humide de chaque spécimen de concentré a été analysée pendant – min sous un microscope composé en utilisant et × objectifsDétection de E histolytica sensu strictoby selles antigène enzyme-linked immunosorbent assay des échantillons d’ol ont été indépendamment traités par un test immuno-enzymatique commercial ELISA pour l’antigène des selles spécifique au test E histolytica E histolytica II; Techlab tel que décrit ailleurs Détection des immunoglobulines M et G dirigées contre des échantillons de sérum humain E histolyticain Des échantillons sériques de patients ont été prélevés et évalués au laboratoire de référence de l’Ontario en utilisant une méthode ELISA interne validée qui détecte l’immunoglobuline M IgM et Anticorps IgG dirigés contre E histolytica En bref, le lysat E histolytica est déposé à la surface d’une plaque ELISA standard. Des antisérums sont ensuite ajoutés au puits revêtu et détectés en utilisant un anticorps secondaire anti-humain couplé à la phosphatase alcaline. de la DO a été calculée comme suit: OD valeur = valeur réelle – blanc sérum contrôle négatif moyenGénotypage deE histolyticaDNA de l’échantillon de selles a été extrait en utilisant QIAamp ADN Stool Mini Kit Qiagen Une réaction en chaîne de la polymérase nichée PCR a été réalisée en premier avec transfert ARN ARN spécifiques ARNt puis avec les paires d’amorces spécifiques à E histolytica ciblant le polymorphe lié à l’ARNt Loci de répétitions courtes en tandem STR loci, avec utilisation de AccuPrime Pfx Supermix Invitrogen et dans les conditions décrites ailleurs Le produit PCR de chaque loci ARNt STR a été séquencé sur un ABI XL Genetic Analyzer Applied Biosystems dans les deux directions avant et arrière avec E histolytica – amorces PCR spécifiques dans notre laboratoire Le tRNA STR typage pour les loci ARNt RR, SD et NK a été fait en conformité avec le schéma de Tawari et al En outre, tRNA STR typage pour les autres locus ARNt, AL, DA, et SQ, a été fait conformément au schéma non publié généreusement fourni par le Dr Graham Clark CG Clark, communication personnelleAnalyse phonylogénétique des types de séquences L’analyse de parcimonie a été réalisée en utilisant Phylip, version Un système de désignation alphanumérique a été conçu pour coder les données de l’ARNt. les séquences de loci STR polymorphes liées, car elles sont plus fidèles au schéma de génotypage STR de l’ARNt En bref, un code alphanumérique unique a été désigné pour chaque bloc dans le tRN Un locus STR; une représentation tabulaire du système de codage est disponible en annexe, qui n’apparaît que dans la version en ligne de la revue Annex, qui n’apparaît que dans la version en ligne du journal. Les données alphanumériques n’étant généralement pas bien supportées par l’analyse bootstrap, un L’analyse par parcimonie de l’ADN a également été réalisée sur les séquences de nucléotides brutes alignées sur Clustal à partir des locus STR polymorphes liés à l’ARNt. L’analyse de parcimonie a été réalisée sur des séquences brutes sous l’hypothèse que les séquences STR d’ARNt sont homologues. générer une relation hypothétique entre les différents isolats d’E histolytica Une analyse bootstrap a été réalisée avec des répliques d’échantillonnage sur les données alphanumériques et également sur des données brutes de séquences nucléotidiques pour déterminer la robustesse de l’ajustement des données à l’arbre généré

Résultats

Cas d’index Une femme bisexuelle, auparavant en bonne santé, âgée d’un an, appelée patient A, a voyagé avec une patiente B et un patient compagnon C en Angleterre, en Allemagne et enfin dans le sud de l’Italie en août; En février, le patient A a présenté une anorexie, une douleur dans le quadrant supérieur droit, des frissons et une fièvre, ° C Après des jours de maladie , elle a été admise à l’hôpital Transaminase et les niveaux de phosphatase alcaline ont été élevés; résultats d’hémocultures étaient négatifs Une tomodensitométrie a noté un abcès du foie ××-cm dans le segment du lobe droit Un échantillon d’aspiration hépatique percutanée a été noté pour ressembler à la pâte d’anchois; aucune bactérie n’a été observée sur la coloration de Gram, et l’échantillon était stérile, mais elle recevait de la ceftriaxone et du métronidazole. Elle était présumée avoir un abcès hépatique pyogène; un cathéter de drainage a été laissé en place pendant des jours, et elle a été renvoyée chez elle et a reçu de l’acide amoxicilline-clavulanique pendant des semaines. Elle s’est rapidement améliorée pendant la première semaine et l’abcès a diminué pendant les semaines suivantes. L’analyse sérologique histolytique a montré que le titre était: Elle a été traitée à nouveau avec du métronidazole, suivi d’iodoquinol. Un inconfort du quadrant inférieur droit a persisté pendant des mois, un épaississement du pôle cæcal a été noté sur l’imagerie abdominale répétée et des ulcères cæcal et iléocæcaux ont été visualisés par coloscopie. aucun organisme n’a été observé par analyse histopathologique

Tableau View largeTélécharger la lameInformations épidémiologiques sur les patients de ce groupe d’amibiase sexuellement transmissibleTable View largeTélécharger diapositiveInformations épidémiologiques sur les patients de ce groupe d’amibiase sexuellement transmissibles À la fin du mois de mai, le patient compagnon masculin C présenté au même hôpital avec l’épaule droite douleur, forte sensibilité du quadrant supérieur droit et température de la fièvre,> ° C Les résultats anormaux des tests hépatiques et d’un scanner ont confirmé la présence d’abcès hépatiques dans les segments du lobe droit et les antécédents de voyage et la présence d’amibiase. contact, il a été traité uniquement avec métronidazole suivi d’iodoquinol, et il s’est amélioré au cours des prochains jours, avec une diminution de la taille de l’abcès du foie résultats sanguins étaient négatifs, et l’analyse sérologique a confirmé l’infection E histolytica et le partenaire du patient C patient D, qui avait L’échographie abdominale du patient B a montré une lymphadénopathie du quadrant inférieur droit. Les patients B et D ont reçu un traitement au métronidazole et à l’iodoquinol. Le patient A a indiqué qu’un homme de plus de partenaire patient E; Figue avait été admise dans un autre hôpital en juin; il a eu un abcès hépatique de ××-cm dans le segment Cela a été confirmé pour être un abcès hépatique amibien sur la base de l’examen des selles, le sérotype analyse, et l’absence d’infection bactérienne dans le sang et le patient abcès E Irak et Afrique du Nord en avril et mai Il a également eu un épaississement et une ulcération cæcale sévère

Figure Vue largeDownload slideRelationship entre les patients AH dans le groupe d’infections Entamoeba histolytica Les nombres dans les cases non ombrées indiquent le mois et l’année de diagnostic pour chaque ALA individuel, abcès hépatique amibienFigure View largeDownload slideRelationship entre patients AH dans le groupe d’infections Entamoeba histolytica Les chiffres dans les cases non ombrées indiquent le mois et l’année de diagnostic pour chaque ALA, abcès hépatique amibienPar souci de transmission, les patients A, B et C ont alerté leurs partenaires sexuels Tableau et Figus Trois autres infections amibiennes asymptomatiques accompagnées de titres sérologiques élevés ont été découvertes parmi les personnes qui ont fait l’objet d’une enquête; Les résultats des échographies abdominales et des tests hépatiques étaient normaux. Trois patients D, F et G étaient des femmes homosexuelles et bisexuelles qui étaient sexuellement liées aux patients A, B et C Ils avaient eu une activité sexuelle orale-anale. Les patients D et F avaient Tous les patients ont été traités avec du métronidazole et de l’iodoquinol. Des échantillons de selles ont ensuite été documentés comme étant exempts d’amebas.Génotypage de la souche de l’éclosion Le tableau résume le profil de génotypage de la souche de l’éclosion chez le patient G. Fig. et données brutes sur les séquences de nucléotides Fig. Résultat de l’analyse bootstrap avec répétitions d’échantillonnage à l’aide des données alphanumériques et des données brutes de séquences nucléotidiques. a montré des valeurs bootstrap inférieures pour les nœuds pour les données alphanumériques une d des valeurs bootstrap plus élevées pour les nœuds pour les données de séquence nucléotidique brute Ceci indique que l’arbre généré à partir des données alphanumériques n’est pas aussi fortement supporté par l’ensemble de données, comparé à l’arbre généré à partir des données brutes de séquences nucléotidiques. l’analyse correspond bien au présent schéma tRNA STR décrit par Tawari et coll. et Graham Clark CG Clark, communication personnelle, dans lequel le génotypage est basé sur les répétitions STR dans chaque bloc de la séquence respective des locus ARNt.

Table View largeDownload slideRésultats de Entamoeba histolytica GenotypingTable Voir grandDownload slideRésultats de Entamoeba histolytica Génotypage

Figure Vue largeTélécharger DiapositiveArborescence de parcimonie non localisée Algorithme de parcimonie « Pars » basé sur les valeurs alphanumériques du transfert Répétitions de tandems courts polymorphes liés à l’ARN Les cercles sur les nœuds indiquent le niveau de support bootstrap basé sur les réplicats, avec les numéros de nœuds suivants: ; noeud,%; noeud,%; noeud,%; et noeud,% Les longueurs de branche sont proportionnelles aux moyennes du nombre de changements d’état reconstruits sur tous les sites sur tous les emplacements les plus parcimonieux possibles des changements d’état parmi les branches. Autrement dit, les branches plus longues indiquent un plus grand nombre de changements du taxon au nœud ancestral hypothétique Les isolats de selles d’Entamoeba histolytica provenant de notre enquête provenaient de patients différents; La souche de référence IMSS de l’American Type Culture Collection ATCC E histolytica était également incluse à titre de comparaison. Vue de la figure grandDownload slideUn arbre de parcimonie «Pars» algorithme de parsimonie «Pars» basé sur des valeurs alphanumériques du transfert loci polymorphique à court ARN tandem loci Les cercles sur les nœuds indiquent le niveau du support bootstrap basé sur les réplicats, avec les numéros de nœuds suivants: node,%; noeud,%; noeud,%; noeud,%; et noeud,% Les longueurs de branche sont proportionnelles aux moyennes du nombre de changements d’état reconstruits sur tous les sites sur tous les emplacements les plus parcimonieux possibles des changements d’état parmi les branches. Autrement dit, les branches plus longues indiquent un plus grand nombre de changements du taxon au nœud ancestral hypothétique Les isolats de selles d’Entamoeba histolytica provenant de notre enquête provenaient de patients différents; la souche de référence de l’American Type Culture Collection ATCC E histolytica HM: IMSS a également été incluse à des fins de comparaison

Figure Vue largeTélécharger DiapositiveArborescence de parcimonie non localisée Algorithme de parcimonie « Pars » basé sur les données de séquence brutes du transfert Répétitions de tandems courts polymorphes liés à l’ARN Les cercles sur les nœuds indiquent le niveau de support bootstrap basé sur les réplicats, avec les numéros de nœuds suivants: %; noeud,%; noeud,%; noeud,%; et noeud,% Les longueurs de branche sont proportionnelles aux moyennes du nombre de changements d’état reconstruits sur tous les sites sur tous les emplacements les plus parcimonieux possibles des changements d’état parmi les branches. Autrement dit, les branches plus longues indiquent un plus grand nombre de changements du taxon au nœud ancestral hypothétique Les isolats de selles d’Entamoeba histolytica provenant de notre enquête provenaient de patients différents; La souche de référence de l’American Type Culture ATCC E histolytica HM: IMSS était également incluse à titre de comparaisonFigure View largeTélécharger DiapositiveArborescence de parcimonie non localisée Algorithme de parsimonie « Pars » basé sur les données de séquence brute du transfert Répétitions de tandems courts polymorphes liés à l’ARN Les cercles sur les nœuds indiquent le niveau de support bootstrap basé sur les réplicats, avec les numéros de nœuds suivants: node,%; noeud,%; noeud,%; noeud,%; et noeud,% Les longueurs de branche sont proportionnelles aux moyennes du nombre de changements d’état reconstruits sur tous les sites sur tous les emplacements les plus parcimonieux possibles des changements d’état parmi les branches. Autrement dit, les branches plus longues indiquent un plus grand nombre de changements du taxon au nœud ancestral hypothétique Les isolats de selles d’Entamoeba histolytica provenant de notre enquête provenaient de patients différents; la souche de référence de l’American Type Culture Collection ATCC E histolytica HM: IMSS a également été incluse à des fins de comparaison

Discussion

colonisés: dans les ménages, au moins un cas supplémentaire d’infection à E histolytica a été identifié au sein des familles, et% des contacts familiaux ont également été colonisés Parmi les participants,% avaient éliminé l’infection par jours Des taux plus élevés d’infection ont été observés Les contacts des patients avec un abcès hépatique amibien ou dysenterie amibienne ou chez les porteurs asymptomatiques, comparés aux sujets témoins Une étude au Mexique a également constaté que% des contacts des porteurs de E histolytica et E dispar étaient également infectés Dans un groupe aux Pays-Bas, le cas index était la mère qui avait contracté l’infection en Inde Deux autres membres de la famille ont développé une maladie symptomatique Tous les membres de la famille avaient des titres sérologiques amibiens élevés et tous avaient E histolytica spécimens de selles; Aucun autre n’avait voyagé en dehors de l’Europe occidentale Un autre rapport signalait la transmission d’E histolytica au sein d’un foyer italien où la servante philippine était la source probable La transmission sexuelle de l’amibiase a été le plus souvent reconnue parmi les HSH ; La plupart des HSH atteints d’amibiase sont colonisés par E dispar, mais la maladie associée à E histolytica survient La transmission hétérosexuelle de E histolytica est rarement décrit, mais un petit groupe d’amibiase est apparu en Italie dans lequel les hommes étaient probablement les cas index. Ils ont ensuite infecté leurs partenaires féminins étaient asymptomatiques, et avaient des infections du foie et du côlon Analyse séroépidémiologique des Japonaises fréquentant une clinique de maladies sexuellement transmissibles Cependant, Phillips et al ne trouvaient pas de protozoaires entériques chez des hommes ou des femmes hétérosexuels fréquentant une clinique de maladies sexuellement transmissibles. Des études récentes suggèrent que seule une minorité de tous les patients E sont infectés par des infections sexuellement transmissibles. infections histolytica progressent vers le développement de symptômes cliniques chez l’hôte, et Les souches de E histolytica isolées d’individus asymptomatiques et symptomatiques présentent des différences de niveau de la souche. La souche identifiée ici semble particulièrement virulente car elle est associée à une atteinte hépatique et cæcale sévère des contacts et à des contacts avec infection amibienne et titres sérologiques amibiens élevés. La transmission a été amplifiée au sein de cette grappe en raison des multiples partenaires, contact oral-anal, et préférences sexuelles mixtes homosexuelle, bisexuelle et hétérosexuelle. A notre connaissance, la transmission homosexuelle féminine de l’amibiase n’a pas été décrite précédemment.Analyse de génotypage utilisant le schéma publié par Tawari et al avec des modifications faites conformément à Graham Clark CG Clark, communication personnelle a révélé que l’isolat de souche épidémique dans le tableau est génétiquement distinct des isolats E histolytica sensu stricto obtenus chez les patients souffrant de diarrhée ou qui étaient asymptomatiques. En outre, avec une annotation alphanumérique ou les données de séquence brute dans les loci ARNt, l’analyse phylogénétique a confirmé que la souche de l’épidémie était génétiquement distincte, par rapport aux isolats moins virulents Avec les deux les données alphanumériques Fig et les données de séquence brutes Fig., la souche virulente de laboratoire, American Type Culture Collection HM: IMSS qui causait à l’origine des ulcères caecaux et des colites , semblait génétiquement plus proche de la souche de l’épidémie, suggérant que le schéma de génotypage pourrait fournir Informations sur la virulence potentielle d’un isolat particulier Davantage d’isolats avec données cliniques associées sont nécessaires pour que le schéma de génotypage soit pleinement corroboré Une des limites de cette étude est que nous n’avons pas pu récupérer l’ADN d’E histolytica chez tous les patients inclus dans l’épidémie. l’enquête épidémiologique suggère fortement que la transmission se produit rouge par propagation directe Les longueurs de branches associées à la souche épidémique suggèrent qu’elle a les changements d’état les plus reconstruits sur tous les sites sur tous les emplacements les plus parcimonieux possible des changements d’état parmi les branches. En résumé, même dans les pays industrialisés, l’amibiase doit être considérée être potentiellement transmissible au sein des ménages, entre partenaires hétérosexuels et surtout entre partenaires de même sexe Les patients atteints d’amibiase devraient être informés des précautions entériques, et des discussions spécifiques sont nécessaires sur le potentiel de transmission sexuelle Bien que le nombre d’isolats dans cette étude ne permette pas les analyses statistiques avec une puissance suffisante, les données suggèrent que le schéma de génotypage utilisé ici peut être utile pour distinguer les souches virulentes des souches moins virulentes de E histolytica sensu stricto

Remerciements

Nous remercions le Dr Donald Martin du Laboratoire de santé publique de Toronto et le Dr Graham Clark de l’École d’hygiène et de médecine tropicale de Londres pour leur aide précieuse. Soutien financier Subvention de démarrage de l’Agence ontarienne de protection et de promotion de la santé à DRPPotentiel conflits d’intérêts IES a récemment reçu des fonds de recherche de Merck et a siégé à des conseils consultatifs pour Tibotec, Abbott et GlaxoSmithKline. Tous les autres auteurs: aucun conflit