Contexte Des données limitées décrivent les résultats cliniques et la réponse immunologique amorcée au cours de la co-infection virale aiguë du VHC et de l’immunodéficience humaine acquise au VIH. Nous présentons une analyse clinique et immunologique détaillée des individus après infection concomitante par le VHC aigu et les méthodes primaires du VIH. Les réponses des lymphocytes T spécifiques du virus ont été évaluées à l’aide d’Elispot, de l’ester succinimidylique de la carboxyfluorescéine proliferative standard et des dosages in vitro de cellules CDT. Résultats Chez tous les patients, un traitement anti-VHC a été initié par interféron-α pégylé et un traitement antirétroviral a été administré précocement. Chez les patients, la réplication du VIH était contenue même après l’interruption de la thérapie antirétrovirale, qui était associée à de fortes réponses cellulaires CD et CDT spécifiques au VIH chez ces patients, multispécifiques. Les réponses des cellules CDT du VHC ont également pu être détectées Aucune réponse des cellules CDT spécifiques du VHC n’a été détectée chez le troisième patient, qui avait également le nombre de cellules CDD de nadir le plus faible au cours de l’infection primaire par le VIH. La thérapie anti-VIH et -HCV devrait être envisagée précocement en cas de coinfection aiguë du VHC et du VIH, car un traitement efficace de la virémie du VHC semble possible même pendant l’infection primaire au VIH. peut être conservé par le traitement du VHC Cependant, l’algorithme de traitement optimal doit être établi dans des essais prospectifs, randomisés

Le virus de l’immunodéficience humaine (VIH) et le virus de l’hépatite C (VHC) partagent des voies de transmission similaires et la coïnfection chronique du VHC, avec toutes ses complications, est devenue une menace majeure pour la santé des personnes infectées par le VIH dans le monde. Cependant, il n’existe que des données limitées concernant les résultats cliniques et les réponses immunologiques amorcées au cours de la co-infection aiguë par le VHC et le VIH. Le traitement précoce de la monoinfection aiguë du VHC entraîne une persistance En outre, les premiers rapports préliminaires montrent un taux relativement élevé de réponse virologique soutenue après le traitement de l’infection aiguë par le VHC chez les patients avec une co-infection VIH chronique En revanche, <% des patients chronique co-infectée avec le VIH et le VHC montrent une réponse virologique soutenue après la thérapie [,,] L'initiation précoce de la thérapie antirétrovirale pendant la monoinfection aiguë du VIH conduit à une amélioration immédiate de certains paramètres immunologiques, tels que le nombre de CDcell et l'état d'activation des lymphocytes T, mais les bénéfices cliniques à long terme de ces interventions ne sont pas prouvés. le traitement de la co-infection virale HCV-VIH simultanée aiguë Ici, nous décrivons l'évolution clinique favorable et le développement de réponses immunitaires adaptatives des individus suite à une infection concomitante aiguë au VHC et à l'infection par le VIH après un traitement antiviral parallèle précoce. et études immunologiques de la co-infection VIH-VHC aiguë

Matériaux et méthodes

Patients Le diagnostic de co-infection VIH-VHC aiguë a été établi chez les personnes précoces après l’exposition et a été confirmé par des critères communément utilisés dans la littérature Tous les patients ont donné leur consentement éclairé pour cette étude approuvée par l’Institutional Review Board du Centre médical universitaire de Hambourg-Eppendorf Les patients ayant une monoinfection du VHC, ainsi que des individus sains, ont servi de témoins pour la validation des tests immunologiques la charge virale VIH a été déterminée en utilisant des dosages COBAS AMPLICOR avec une limite de détection de & lt; Les copies d’ARN / ml et la virémie quantitative du VHC ont été déterminées par un test HCV Monitor avec une limite de détection de & lt; Le nombre de cellules CDT de Roche Diagnostik Nadir, défini comme le nombre de CDT mesuré historiquement le plus bas après infection par le VIH , a été déterminé par revue de la carte. Plasma et cellules mononucléaires du sang périphérique Les PBMC de tous les patients ont été collectées longitudinalement. les peptides HCV de mer fréquemment détectés ont été synthétisés correspondant aux séquences d’acides aminés du génotype a de la souche HCV- ou les peptides CDoptimaux spécifiques au VIH appariés de HLA du patient de la souche de VIH- / IIIB clade B Les protéines recombinantes du VIH p et gp ont été achetés par Tebu-bio, et les protéines HCV NS / NS Ca-a- et NS NS aa- ont été achetés par Chiron CorporationHLA typage Molecular HLA classe I typage a été effectuée au centre de transfusion du Centre médical universitaire de Hambourg-Eppendorf, comme décrit ailleurs Cellule culture et test Elispot Des lignées cellulaires CDT spécifiques au VHC ont été générées comme décrit ailleurs [,,] Brièvement, les lignées cellulaires ont été générées par stimulation de PBMC fraîches. s avec du milieu R additionné d’interleukine-U / mL recombinante et les peptides HCV respectifs à une concentration de μg / mL Des dosages Elispot sur des PBMC ou des lignées cellulaires ont été réalisés comme décrit ailleurs [,,] Bref, des plaques de polyvinylidène -well; Millipore ont été enrobés avec μg / mL d’anticorps anti-interféron-γ humain recombinant. Endogène dans une solution saline tamponnée au phosphate à ° C pendant une nuit. Les peptides ont été directement ajoutés aux puits à une concentration finale de μg / mL. Des cultures de cellules CDT polyclonales spécifiques au VHC, cellules / puits ont ensuite été ajoutées. Les plaques ont été incubées pendant h à ° C en% de CO. Les réponses d’Elispot ont été considérées positives si le nombre de taches était supérieur au bruit de fond et & gt; CFSE ont été réalisées en utilisant des protéines recombinantes à des concentrations de μg / mL Les échantillons ont été colorés avec des anticorps de surface Becton-Dickinson comme décrit par ailleurs , et les données ont été acquises sur un FacsCalibur. cytomètre et ont été analysés en utilisant le logiciel Cell Quest Becton-Dickinson

Résultats

Tous les patients ont d’abord été vus et inclus dans cette étude. Les patients ont été suivis pendant une durée moyenne de plusieurs semaines. L’évolution clinique de tous les patients est représentée sur la figure et les données cliniques supplémentaires sont résumées dans le tableau.

Figure View largeTélécharger la lameClinique, virologique et immunologique de l’infection aiguë chez les patients co-infectés par le virus de l’immunodéficience humaine VIH et le virus de l’hépatite C VHC A, Patient HB, Patient IC, Patient J Graphes supérieurs, tracé longitudinal du taux d’ARN du VHC et alanine aminotransférase ALT Niveaux La zone grisée indique le traitement anti-VHC. Graphiques moyens, tracé longitudinal de la charge d’ARN du VIH et numérations CDcell La zone ombrée en rose indique un traitement antirétroviral hautement actif. HAART Graphiques inférieurs, réponses ex vivo Elispot longitudinales peptides optimaux Ab, anticorps; PBMC, cellules mononucléées du sang périphérique; PEG-IFN-a, interféron-a pégylé; RT, transcriptase inverse; SFC, cellule de formation de taches; VL, charge viraleFigure View largeTélécharger Diapositive clinique, virologique et immunologique de l’infection aiguë chez les patients co-infectés par le virus de l’immunodéficience humaine VIH et virus de l’hépatite C VHC A, patient HB, patient IC, patient J Graphes supérieurs, tracé longitudinal du taux d’ARN du VHC et Niveaux ALT d’alanine aminotransférase La zone grisée indique un traitement anti-VHC Graphiques moyens, Tracé longitudinal de la charge d’ARN du VIH et numérations CDcell La zone grisée en rose indique une thérapie antirétrovirale hautement active HAART Graphiques inférieurs, Réponses longitudinales ex vivo Elispot contre HLA-appariés CD Peptides optimaux pour le VIH Ab, anticorps; PBMC, cellules mononucléées du sang périphérique; PEG-IFN-a, interféron-a pégylé; RT, transcriptase inverse; SFC, cellule de formation de taches; VL, charge virale

Les taux d’enzymes hépatiques étaient significativement élevés, et un résultat positif d’un test d’anticorps anti-VHC était détectable à ce moment-là. La séroconversion VIH a été documentée pour la première fois un mois après la présentation primaire. CD / CDratio, avec un pic de charge virale du VIH de, copies / mL et une charge virale maximale de VHC de, UI / mL de génotype b Traitement antirétroviral avec ténofovir, lamivudine et éfavirenz et traitement anti-VHC avec interféron α α pégylé pendant des semaines La patiente a présenté sa patiente Fig. B dans notre clinique externe quelques jours après l’histoire crédible d’une blessure par piqûre d’aiguille avec l’aiguille d’un utilisateur de drogue injectable infectée par le VIH-VHC, infligée par son conjoint dans un cas de Un diagnostic initial à la clinique externe a détecté l’ARN du VIH par PCR, ce qui a confirmé le diagnostic d’infection primaire par le VIH. Le traitement antirétroviral a débuté avec la zidovudine, la lamivudine et L’éfavirenz au jour après l’exposition Le patient présentait également des taux élevés de transaminases hépatiques Les résultats du premier test d’anticorps anti-VHC effectué le jour étaient négatifs. e, mais elle a eu un résultat positif au jour après que le test a été répété en raison de ses antécédents d’exposition significative. Cette personne avait un nombre de cellules CD / nadir CD% nadir; CD / CDratio, avec un pic de charge virale VIH de ,, copies / mL et une charge virale maximale de VHC de, IU / mL génotype traitement antiviral VHC avec interféron-α a pégylé a été initié au lendemain de l’exposition et a été maintenu pendant des semaines. patient Fig. C, un travailleur de la santé, a eu des résultats négatifs pour le VIH et le VHC lors d’un examen de santé au travail un an avant la première présentation. Les résultats normaux des tests de la fonction hépatique ont été documentés lors d’un bilan de santé au travail. Il présentait des signes et des symptômes d’une maladie virale aiguë, avec des ganglions lymphatiques enflés, une température corporelle élevée et une faiblesse générale. Le mode d’infection était probablement une blessure par piqûre d’aiguille, car le patient travaille comme patient. infirmière dans la salle d’opération, bien que nous ne puissions pas retracer la source VIH et les anticorps anti-VHC ont été détectés à ce moment-là Cette personne a montré un nombre de cellules CD / nadir CD% nadir ; CD / CDratio, avec un pic de charge virale du VIH de, copies / mL et une charge virale maximale du VHC de « IU / mL génotype traitement anti-VHC avec interféron alpha αa et ribavirine pendant des semaines a été commencé le jour, et le traitement antirétroviral Le ténofovir, la lamivudine et l’éfavirenz ont débuté le jour. Évolution clinique et issue du traitement Tous les patients ont atteint une charge virale VIH. copies / mL dans les mois suivant l’instauration du traitement antirétroviral hautement actif HAART En outre, une charge virale indétectable du VHC et / ou une réponse virologique rapide dans les semaines suivant l’instauration du traitement anti-VHC ont été observées chez tous les patients. Les traitements H ont été bien tolérés par tous les patients et aucun événement indésirable majeur n’est survenu. Les patients HA et I ont montré un rebond viral à une charge virale médiane du VIH de copies / mL et maintenu un nombre de CDcell de & gt; Le nombre de CDcell était stable chez le patient I sans traitement pendant des années après une interruption structurée du traitement, et le patient H a recommencé le traitement HAART plusieurs années après l’interruption du traitement structuré, à un nombre de cellules CD / μL de données non Dans le cas du patient J, le contrôle de la virémie VIH a été interrompu lors d’une interruption structurée du traitement, et le traitement HAART a dû être réinitialisé après augmentation de la charge virale VIH, copies / ml et diminution du nombre de cellules CD / μL Fig. et H ont bien réagi après la réinitiation des schémas immunologiques HAARTI des patients pendant l’infection aiguë et la thérapie. Les réponses cellulaires CDT spécifiques du VIH contre les peptides optimaux du VIH concordent avec le HLA. J’ai chacun montré des réponses fortes contre au moins le peptide VIH jusqu’aux cellules formant des cellules ponctuelles / PBMC. Sans surprise , ces réponses des lymphocytes T ont diminué en f Après la thérapie antirétrovirale, la charge virale du VIH est devenue indétectable et a réapparu seulement pendant le rebond viral après l’arrêt de la thérapie antirétrovirale. De plus, des réponses cellulaires CDT prolifératives spécifiques au VIH ont été maintenues chez ces patients tout au long de l’infection. la thérapie a été commencée seulement après séroconversion complète, et ce patient initialement présenté avec un compte de CDcell & lt; cellules / μL Nous n’avons pas été en mesure de détecter des réponses CDT spécifiques au VIH CDor spécifiques au VIH dans nos tests Fig.

Figure Vue largeDownload slideAnalyse des réponses des cellules CDT prolifératives Les graphiques représentent les résultats représentatifs des tests Elispot Chaque barre dans les graphiques représente une réponse contre un seul peptide du VHC du virus de l’hépatite C, par exemple, P et VHC aa- Patients H graphique gauche et I graphique du milieu ont montré des réponses Elispot contre plusieurs peptides Aucune réponse significative n’a été détectée pour le patient J Graphe frais Les cellules CDT fraîches des patients H, I et J ont été stimulées avec un ensemble de concentrations de peptides mériques spécifiques du VHC, fréquemment reconnues, ont été cultivées en présence d’interleukine pendant des jours, comme décrit précédemment des cultures de cellules CDT spécifiques du VHC ont ensuite été testées pour des réponses spécifiques au VHC interféron-y dans des dosages Elispot monospécifiques témoins non montrés SFC, spot- formation de cellFigure View largeDownload slideAnalyse des réponses des cellules CDT prolifératives Les graphiques représentent les résultats représentatifs des tests Elispot Chaque barre de les graphes représentent une réponse contre un seul peptide du VHC du virus de l’hépatite C, par exemple, P et VHC aa- Patients H gauche graphique et I moyen graphique ont chacun montré des réponses Elispot contre plusieurs peptides Aucune réponse significative n’a été détectable pour le patient J les patients H, I et J ont été stimulés avec un ensemble de concentrations de peptides de mer spécifiques du VHC, fréquemment reconnus, [μ], et ont été cultivés en présence d’interleukine pendant des jours, comme décrit précédemment HCV- des cultures de cellules CDT spécifiques ont ensuite été testées pour des réponses spécifiques au VHC interféron-y dans des dosages Elispot monotipeptiques pendant la nuit contrôles non montrés SFC, cellule formant des spotsPour évaluer si des réponses cellulaires CDT spécifiques du VHC ont été amorcées pendant la phase aiguë de l’infection par le VHC, Nous avons également effectué des tests CFSE de prolifération du VHC contre des protéines recombinantes du VHC à des moments ultérieurs après l’élimination du virus VHC. Toutes les réponses des cellules CDT spécifiques du VHC ont également été déterminées dans un essai d’expansion des lymphocytes T in vitro sensibles Auparavant, nous avons pu démontrer que les patients infectés par le VHC, positifs à l’ARN du VHC, mais non chroniquement infectés présentaient des réponses cellulaires CDT prolifératives En revanche, nous n’avons pas détecté de réponses prolifératives significatives Fig., Tableau, et données non montrées Nous avons cependant été capables de récupérer plusieurs réponses de cellules CDT du VHC jusqu’à des cellules formant des cellules CDT dans un panel du VHC spécifique le plus fréquemment détecté. Fig. Ceci est comparable aux résultats chez les patients dont la monoinfection du VHC s’est spontanément résolue et les données non montrées après une culture à court terme et l’ajout d’interleukine exogène. Nous n’avons détecté aucune réponse cellulaire CDT spécifique du VHC. après l’expansion in vitro chez le patient J, qui n’a pas montré de réponses lymphocytaires T spécifiques du VIH et avait un nombre de cellules CD nadir & lt; cells / μL Fig Cependant, comme nous n’avons examiné que les réponses des CDT spécifiques du VHC aux points d’infection ultérieurs, nous ne pouvons exclure la possibilité que les réponses spécifiques au VHC aient été amorcées initialement et seulement diminuées au fil du temps.

Figure Vue large Diapositive téléchargeable Diacétate de succinimidyle de la carboxyfluorescéine représentative Essai de prolifération CFSE du patient H Des cellules proliférées de CDcells du patient sont montrées du côté gauche de la parcelle après des jours de restimulation dans le milieu de culture cellulaire en présence de la concentration de protéine VIH p du virus de l’immunodéficience humaine recombinante, μg / mL mais pas VIH gp ou protéines recombinantes du VHC du virus de l’hépatite C NS et NS ou NS Entérotoxine B staphylococcique B SEB servait de témoin positif POS Une réponse proliférative positive était définie comme étant le nombre de cellules de bruit de fond et de% contrôle; PerCP, complexe péridinine-chlorophylle-protéineFigure View largeTélécharger Diapositive représentative carboxyfluorescéine diacétate succinimidyle ester CFSE proliférative du patient H cellules CDcells proliférées faible en CFSE sont présentés sur le côté gauche de la parcelle après des jours de restimulation en milieu de culture cellulaire en présence de recombinaison humaine virus de l’immunodéficience Concentration protéique du VIH p, μg / mL mais pas gp du VIH ou protéines recombinantes du VHC du virus de l’hépatite C NS et NS ou NS Enterotoxine B Staphylococcique B SEB servait de témoin positif POS Une réponse proliférative positive était définie comme le contexte et% cellules à faible CFSE NEG, contrôle négatif; PerCP, complexe péridinine-chlorophylle-protéine

Discussion

décrits par Ridzon et al ne sont pas clairs et pourraient refléter le pire résultat possible dans de tels cas Actuellement, le traitement antirétroviral pendant la mono-infection aiguë par le VIH n’est recommandé que pour les patients hautement symptomatiques, en particulier ceux atteints de maladies neurologiques. ] Cependant, les données préliminaires suggèrent qu’une intervention très précoce après l’infection pourrait être plus efficace pour obtenir un bénéfice à long terme . Il existe des données préliminaires soutenant l’idée que l’interféron-α, qui est l’épine dorsale de tout anti-VHC. Le traitement antirétroviral a également une activité anti-VIH dans l’infection primaire et devrait faire partie du traitement antirétroviral chez ces patients Chez les patients de notre étude, le traitement antirétroviral a débuté précocement lors de l’infection primaire, au moment de la séroconversion. contrôle expérimenté de la réplication virale après l’arrêt du traitement antirétroviral, qui était associé à la production de cellules T robustes et spécifiques du VIH. En revanche, chez le troisième patient, la thérapie antirétrovirale a débuté seulement après une séroconversion complète et après que le nombre de cellules CD a déjà diminué à & lt; Ce patient n’a pas réussi à contrôler la réplication virale après une interruption structurée du traitement et n’a pas développé de réponse T large spécifique au VIH. Nous n’avons pas non plus détecté de réponses CDT spécifiques du VHC même après que ce patient a montré une réponse virologique soutenue. Le traitement antiviral de l’infection aiguë au VHC chez les patients monoinfectés est généralement recommandé si la virémie du VHC ne s’est pas spontanément dissipée quelques semaines après la séroconversion, mais le meilleur algorithme de traitement est encore discutable . Le VIH et le VHC ne sont apparus qu’au cours des derniers mois Parmi les questions qui doivent être abordées à l’avenir figurent le délai optimal pour le début et la durée de la thérapie VHC et si la ribavirine devrait faire partie du traitement. moment, ces décisions de traitement doivent être prises sur une base individuelle, en tenant compte des paramètres cliniques En particulier, on ne sait pas si l’initiation parallèle de la thérapie HAART est nécessaire. Hypothétiquement, l’amorçage et le montage des réponses des lymphocytes T contre une seconde infection virale sont très probablement négativement affecté lors de l’infection primaire au VIH en raison de l’activation immunitaire massive, qui est associée à une déplétion importante de cellules CCRCDT infectées imposant une contrainte homéostatique considérable sur le maintien du pool de cellules CDT mémoire Cela pourrait être particulièrement important pour l’évolution clinique coïncidence aiguë du VHC, car les fortes réponses cellulaires CDT spécifiques du VHC sont corrélées avec le contrôle du virus Tous les patients décrits ici ont obtenu une réponse virologique soutenue après l’initiation précoce de la thérapie VHC et l’initiation parallèle de la thérapie antirétrovirale. pour détecter les réponses de cellules CDT spécifiques du VHC prolifératives par la norme Bien que la résolution spontanée d’une infection aiguë par le VHC soit presque toujours corrélée à de fortes réponses prolifératives aux CDT, celles-ci ne sont pas toujours présentes chez les patients traités avec succès pour une infection HCV aiguë ou chronique et qui présentent une réponse virologique soutenue ; la relation entre l’immunité adaptative et les résultats du traitement semble plus complexe. Cependant, chez les patients H et I, nous avons pu détecter des réponses cellulaires CDT spécifiques du VHC significatives en utilisant un protocole de stimulation in vitro plus sensible . Il reste à savoir si ces réponses spécifiques au VHC sont de pertinence clinique, ce sont des marqueurs immunologiques qui prouvent que les lymphocytes T spécifiques du VHC ont été amorcés et préservés potentiellement par une thérapie antivirale précoce même pendant l’infection primaire par le VIH. Cette notion est soulignée par le fait que ces cellules les réponses ne sont généralement pas détectées chez les patients monoinfectés par le VHC , ou chroniquement co-infectés par le VIH et le VHC Selon des travaux antérieurs, nous avons pu détecter des réponses cellulaires CDT spécifiques du VHC uniquement chez les patients infectés par le VIH. nadir CDcell count & gt; cellules / μL En conclusion, un degré élevé de vigilance clinique concernant la possibilité d’une infection concomitante au VHC est justifié chez les patients atteints d’une infection aiguë au VIH et vice versa. Nos données indiquent que le traitement antiviral du VHC devrait être envisagé tôt dans le De toute évidence, des essais prospectifs plus importants sont nécessaires pour déterminer le meilleur traitement anti-VHC et si un traitement antirétroviral précoce est nécessaire pour obtenir les résultats cliniques et immunologiques favorables. les résultats décrits ici

Remerciements

Nous remercions les patients qui ont participé à cette étude et Janine Mohn pour l’aide technique. Soutien financier Ministère fédéral de l’éducation et de la recherche à JvL et JH, Forschungsförderungsfond Medizin, Universitätsklinikum Hambourg Eppendorf à JSzW, Werner-Otto-Stiftung à JSzW, le MSD Stipendium VIH à JSzW, et la Deutsche Forschungsgemeinschaft SCHU / – à JSzWPotential conflits d’intérêts JvL a reçu des honoraires de conférencier et des subventions sans restrictions de Roche Tous les autres auteurs: no conflicts