Contexte Des foyers bien documentés d’infection par la toxoplasmose humaine sont rarement signalés. Nous décrivons ici une éclosion communautaire de toxoplasmose multiviscérale survenue à Patam, village surinamais près de la frontière franco-guyanienne. Méthodes De fin décembre à mi-janvier, patients adultes à Patam , y compris les femmes enceintes, ont été initialement hospitalisées pour une toxoplasmose multiviscérale Une enquête épidémiologique franco-surinamaise a été menée dans le village; Des échantillons sanguins et environnementaux ont été prélevés. Pour tous les cas confirmés de toxoplasmose confirmés par sérologie, des analyses moléculaires et des inoculations de souris ont été réalisées pour le diagnostic et la caractérisation génétique de Toxoplasma gondii. Les patients hospitalisés, dépourvus d’immunodéficience, ont été une maladie infectieuse avec une atteinte multiviscérale L’examen sérologique a confirmé la toxoplasmose aiguë Un adulte est décédé et un nouveau-né et un fœtus atteints de toxoplasmose congénitale sont décédés. Au cours de l’enquête, d’autres cas de toxoplasmose ont été diagnostiqués chez les villageois. Au total, nous avons signalé des cas de toxoplasmose: cas multiviscéraux chez des adultes immunocompétents, entraînant la mort; cas de toxoplasmose congénitale létale chez un nouveau-né et un fœtus; et cas symptomatique chez un enfant L’analyse moléculaire a démontré que des isolats identiques de souches atypiques seulement étaient responsables d’au moins des cas de toxoplasmose dans l’épidémie Aucune source épidémiologique n’a pu être liée à cette grave épidémie de toxoplasmose dans toute la communauté. Conclusion Ce rapport est en accord avec les particularités de la toxoplasmose chez des souches atypiques récemment décrites en Guyane

La toxoplasmose, une maladie protozoaire omniprésente causée par Toxoplasma gondii, peut infecter tous les animaux à sang chaud, les hôtes définis étant des félins. Par conséquent, il existe une grande variété de sources de transmission de l’infection humaine humaine par ingestion d’oocystes infectieux. l’environnement ou les kystes tissulaires contenus dans la viande crue ou insuffisamment cuite ou les abats primaires de différents animaux Les principales voies de transmission sont différentes dans les populations humaines et dépendent de la culture sociale, des habitudes alimentaires et / ou des facteurs environnementaux. On signale rarement des cas de familles monoparentales ou de petits groupes [,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,], et la plus importante éclosion de toxoplasmose documentée, associée à un approvisionnement en eau municipal, Canada Nous rapportons ici, à notre connaissance, la première éclosion humaine de toxoplasmose avec isolement et caractérisation de la souche responsable

Matériaux et méthodes

Description de l’éclosion

Début janvier, les services de santé de la Direction de la Santé et du Développement Social de la Guyane ont été informés par le Laboratoire de Parasitologie-Mycologie de l’Hôpital de Cayenne Cayenne, Guyane française, de cas de toxoplasmose multiviscérale chez l’adulte, dont le cas de décès et cas de toxoplasmose congénitale létale chez le fœtus et le nouveau-né Tous les patients résidaient dans le village de Patam Ce petit village rural surinamais, situé près de la frontière guyanaise entre le fleuve Maroni ~ km du village et la ville frontalière surinamaise d’Albina ~ km du village, est entouré par la forêt amazonienne Trente-quatre personnes marrons appartenant à la même famille vivaient dans le village Les aînés étaient des sœurs vivant avec leurs descendants Les premiers patients y compris les femmes enceintes ont été hospitalisés à l’hôpital français de Saint-Laurent -du Maroni Saint-Laurent-du Maroni, Guyane française Un diagnostic sérologique de toxopie aiguë la lasmose a été réalisée sur la base d’un taux élevé d’IgG anti-toxoplasmique, de présence d’IgM et de faible avidité & lt;% d’anticorps anti-Toxoplasma IgG Dans le même temps, un cinquième patient de Patam a été admis à l’hôpital de Paramaribo, Suriname D’autres infections cliniques ont été signalées parmi les habitants du village. Ceci a motivé une vaste enquête épidémiologique conjointe à la mi-janvier impliquant les autorités médicales de l’Unité de Parasitologie-Mycologie de l’Hôpital de Cayenne et la Direction de la Santé et du Développement Social de Cayenne. , Bureau de la santé de la Guyane française et du Suriname Bureau Openbare Gezondheidszorg, Paramaribo, Suriname

Enquête dans le village

Détection de cas supplémentaires Une fois les examens cliniques effectués, les personnes du village ont été initialement classées comme symptomatiques ou asymptomatiques sur la base de critères cliniques standard; Les patients présentant de la fièvre ou des signes généraux, tels que myalgie et déficience, hypertrophie tissulaire (foie et rate) et / ou symptômes respiratoires inférieurs ont été considérés comme symptomatiques. Les patients symptomatiques ont été traités par sulfadiazine plus pyriméthamine. Toxoplasmose aiguë, définie comme une positivité pour les IgG et IgM spécifiques de Toxoplasma et une faible avidité des IgG spécifiques de Toxoplasma en présence ou en l’absence de symptômes; la toxoplasmose chronique, définie comme une positivité pour les IgG spécifiques de Toxoplasma mais pas pour les IgM et une forte avidité des IgG spécifiques de Toxoplasma en présence ou en l’absence de symptômes; Les personnes qui n’ont pu être classifiées, c’est-à-dire qui présentaient des symptômes, mais dont les résultats sérologiques étaient négatifs ou qui n’étaient positives que pour l’IgM spécifique à Toxoplasma, ont été testées périodiquement pour la séroconversion En cas d’infection aiguë, la PCR réalisée sur un échantillon sanguin a confirmé le diagnosticInspection épidémiologique des facteurs de risque Les adultes de chaque ménage ont été régulièrement interrogés sur les repas consommés conjointement durant les semaines précédant le début de l’épidémie, y compris les pratiques alimentaires et l’origine En plus de la description du biotope forestier sauvage entourant le village, à savoir le type de végétation forestière, les aspects ruraux et le type de faune, d’autres données épidémiologiques, par exemple la présence de félins errants ou de félins, ainsi que les activités de chasse traditionnelles. ont été constatéesEnquêtes environnementales Des échantillons de sol et de fèces de Les sites de prélèvement ont été choisis au hasard, mais certains ont été sélectionnés en tant que zones à risque Toxoplasma sur la base d’informations provenant des habitants, tels que le sol en contact avec les excréments sauvages. les chats

Figure Vue largeTélécharger Diagramme du village de Patam, y compris les résidences des patients atteints de toxoplasmose et de sites d’échantillonnage Données non Nombre de patients infectés / Nombre de personnes dans le ménage aUne patiente était visiteuse bInclut les patients atteints de cas congénitauxFigure Vue largeTélécharger Diagramme du village de Patam, y compris résidences des patients atteints de toxoplasmose et de sites d’échantillonnage Données non Nombre de patients infectés / Nombre de personnes dans le ménage aUne patiente était une visiteuse bInclut les patients atteints de cas congénitaux

Méthodes de laboratoire

Examen de toxoplasmérologie Tous les échantillons de sérum ont été analysés en utilisant l’EIA pour les immunoglobulines, IgG et IgM spécifiques à Toxoplasma. Abbot Diagnostics Lorsque les résultats pour l’IgM étaient positifs, des tests supplémentaires, tels que l’immunofluorescence indirecte IgM IFA; bioMérieux, test d’agglutination immunosorbant Toxo-ISAGA IgM; bioMérieux, et test d’avidité IgG VIDAS Toxo-IgG Kit d’avidité; bioMérieux, ont été réalisées pour confirmer la présence et la spécificité des anticorps IgM et, par conséquent, une infection aiguëRetroviral investigation Pour tous les patients sauf le fœtus et le nouveau-né, le statut sérologique VIH a été confirmé par des tests VIH VIH / Axsym microparticule Genescreen Plus VIH Ag-Ab EIA, Biorad Nous avons utilisé le Murex HTLV- / EIA Abbott pour dépister le virus lymphotrope T humainDétection de tomoplasmaocystes Nous avons utilisé des méthodes standard, par exemple, la flottation du saccharose pour la détection des oocystes Toxoplasma à partir de prélèvements de sol ou d’excréments . par examen sous filtre d’excitation d’excitation UV, – nm pour la détection de l’autofluorescence des oocystes et de la PCR en temps réel utilisant le gène B Approximativement g de sol ont été collectés à chaque site d’échantillonnage; Comme le montrent les tableaux, une tentative de détection de l’ADN parasitaire et d’isolement des espèces Toxoplasma a été réalisée au Laboratoire de Parasitologie-Mycologie de l’Hôpital de Limoges, Limoges, France. échantillons de sang périphérique conservés dans l’EDTA obtenus à partir de patients patients,, et – et sur plusieurs échantillons de tissus, à savoir le cerveau, le foie, le poumon et le liquide amniotique du patient foetus expulsé ADN a été extrait de ces échantillons en utilisant un QIAamp ADN minikit Qiagen et a été Puis, on a inoculé deux souris suisses par voie intrapéritonéale avec des échantillons de sang. Les souris n’ont pas été inoculées avec des échantillons de tissu fœtal du patient, car ces échantillons avaient été conservés dans du formaldéhyde. Aucun échantillon n’était disponible chez le nouveau-né, qui est décédé aux jours de la vie

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients hospitalisés dans une épidémie de toxoplasmose dans un village amazonienTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients hospitalisés dans une épidémie de toxoplasmose dans un village amazonien

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients ayant reçu un diagnostic de toxoplasmose au cours de l’enquête de villageTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients ayant reçu un diagnostic de toxoplasmose au cours de l’enquête villageoiseAnalyse génétique deToxoplasmaisolates La caractérisation génétique des isolats de T gondii a été réalisée par séquençage aux marqueurs microsatellites TUB, W, TgM-A, B et B et analyse GeneScan du polymorphisme de longueur à des marqueurs microsatellites polymorphiques supplémentaires N, N et AA Les mélanges réactionnels et les conditions d’amplification ont été réalisés conformément aux méthodes publiées Toutes les séquences aux marqueurs TUB, W, TgM- A, B et B ont été soumis aux numéros d’accès GenBank: EF-EF

Résultats

Caractéristiques des patients hospitalisés Les caractéristiques complètes de tous les patients sont résumées dans le tableau L’heure du début des symptômes impliquait une contamination probable au cours de la deuxième semaine de décembre Tous les patients présentaient initialement des signes généraux, avec atteinte clinique majeure progressive Pneumopathie bilatérale et la cytolyse hépatique étaient les conditions les plus fréquentes à la présentation troubles neurologiques perte de conscience et anomalies cardiaques échographiques myocardiopathie dilatée légère avec péricardite chez les patients et, respectivement, le fœtus livré présentant des signes compatibles avec un hydrops fetalis non immunisé tous les patients ont exprimé des profils sérologiques compatible avec la toxoplasmose aiguë Pour le patient, le sérodiagnostic a été réalisé post mortem, car l’état clinique du patient s’est rapidement aggravé sous traitement antibiotique, et le patient est décédé après une défaillance multiviscérale globale, avec troubles neurologiques. ers, détresse respiratoire, saturation en oxygène,%, avec L d’oxygène, cytolyse hépatique et insuffisance rénale aiguë Patient décédé à l’âge adulte avec des signes sérologiques de toxoplasmose primaire récente Les autres résultats des tests sérologiques de recherche microbiologique et de rétrovirus étaient négatifs. et, tous les patients ont été guéris sans aucune complication avec le traitement de sulfadiazine plus pyrimethamine Investigation clinique et épidémiologique dans le village Trente et un individus ont été examinés âge, mois – années; adultes et enfants La plupart d’entre eux étaient des habitants du village; étaient des visiteurs vivant dans le village voisin et passaient beaucoup de temps avec les habitants de Patam. Deux résidents étaient absents Huit patients étaient symptomatiques: présentant des symptômes de bronchiolite et présentant des symptômes compatibles avec la toxoplasmose, tels que des signes généraux, une splénomégalie ou une hépatomégalie Chez les patients symptomatiques, seuls des cas additionnels de toxoplasmose aiguë chez l’adulte et chez l’enfant ont été confirmés sérologiquement et par PCR www.slimex.eu. Pour le second, le diagnostic a été posé un mois après le début de l’épidémie Pour les autres patients symptomatiques, des tests sérologiques ont été réalisés. le premier test sérologique, et les résultats sont restés négatifs Parmi les autres patients asymptomatiques, il y avait des échantillons sériques négatifs pour T gondii et des preuves sérologiques de toxoplasmose chronique. Tous les patients avaient des résultats sérologiques VIH / VIH / virus lymphotrope / sérologique humains négatifs. Parce que tous les cas confirmés ont été enregistrés, géograp Il y avait des maisons en bois traditionnelles avec une zone de sable centrale et un potager. Il n’y avait pas d’électricité ou d’eau, et chaque maison avait un réservoir contenant de l’eau de pluie et de l’eau de ruissellement. Les habitants ont consommé des aliments congelés mais aussi chassés. Les facteurs de risque liés à la viande n’ont pas été retrouvés, car la consommation de viande insuffisamment cuite est contraire à la foi évangélique de l’époque. les habitants A ce jour, tous les échantillons environnementaux, sol et fèces de chats sauvages ont été testés négatifs pour les oocystes Toxoplasma inoculations de souris et les caractéristiques moléculaires des isolats Comme indiqué dans les tableaux et, les résultats de PCR avec gène B étaient positifs pour les patients patients, , et l’isolement des espèces Toxoplasma chez les souris a été couronnée de succès pour les patients, patients, et, y compris les patients qui avaient PCR négative Les isolats de Toxoplasma étaient des souches virulentes, car la majorité des souris inoculées mouraient – quelques jours après l’inoculation

Table View largeTélécharger slideDiagnostic par PCR et bio-essai chez la sourisTable View largeTélécharger la lameDiagnostic par PCR et bio-essai chez la sourisLa caractérisation génétique a été possible pour les isolats Toxoplasma obtenus chez la souris GUY-ABE, GUY-TER, GUY-ANG et GUY-TER directement à partir d’un échantillon de liquide amniotique du fœtus GUY-ANG Le séquençage des marqueurs microsatellites TUB, W, TgM-A, B et B a montré des séquences identiques à chaque marqueur chez ces patients. Figure 3 marqueurs microsatellites polymorphiques supplémentaires N, N et AA a également montré des allèles identiques après l’analyse de Genescan du tableau de polymorphisme de longueur Avec un total de marqueurs, la description d’un génotype multilocus unique chez les patients atteints de toxoplasmose a démontré que seule la souche était responsable de l’épidémie chez au moins des patients. et III souches figure, cette souche présentait un génotype atypique avec des allèles atypiques à W, TgM-A et B; ceux-ci sont différents des allèles correspondants des souches I, II ou III. Les allèles atypiques étaient constitués de polymorphismes nucléotidiques uniques dans les régions flanquantes des microsatellites à TgM-A et B ou de nombres inhabituels de répétitions dinucléotidiques dans les régions microsatellites [TC] [TG] à W, [TG] à TgM-A, et [TC] à B

Vue de la figure grandDownload polymorphismsNucleotide polymorphismes à des marqueurs microsatellites TUB, W, TgM-A, B et B Les séquences de souches archétypales BK, II ME et III CEP ont été comparées avec des séquences obtenues à partir du GUY – ABE, GUY – TER , GUY – TER, GUY – ANG et GUY – ANG Les allèles SNP et MS ont été définis par les sites polymorphes dans la région flanquante et les séquences microsatellites, respectivement BK, Me et CEP sont les types de référence I, II et III. les souches, respectivement Allèles, et sont réservées aux lignées clonales I, II et III Pour l’allèle, les types I et II partagent l’allèle; pour l’allèle, les types II et III partagent l’allèle; Pour les allèles, les allèles I, II et III partagent l’allèle Allèles ⩾ sont utilisés pour les allèles atypiques Les boîtes avec fond gris indiquent les séquences microsatellites Les boîtes avec fond noir indiquent les polymorphismes mononucléotidiques non partagés par au moins des séquences archétypales Dans chaque marqueur, les sites sont délimités par un astérisque * indiquent les sites de délétion par rapport à la séquence microsatellite la plus longue Les données de séquences nucléotidiques sont disponibles sur les numéros d’accès GenBank: EF-EFFigure View largeTéléchargement slideNucléotides nucléotidiques aux marqueurs microsatellites TUB, W, TgM-A, B et B Séquences de type archétypal Les souches I BK, II ME et III CEP ont été comparées aux séquences obtenues à partir des isolats GUY – ABE, GUY – TER, GUY – TER, GUY – ANG et GUY – ANG. Les allèles SNP et MS ont été définis par les sites polymorphes dans la région flanquante et les séquences microsatellites, respectivement BK, Me et CEP sont des souches de référence de type I, II et III, respectivement Alleles, et sont réservées aux lignées clonales I, II, et III Pour l’allèle, les types I et II partagent l’allèle; pour l’allèle, les types II et III partagent l’allèle; Pour les allèles, les allèles I, II et III partagent l’allèle Allèles ⩾ sont utilisés pour les allèles atypiques Les boîtes avec fond gris indiquent les séquences microsatellites Les boîtes avec fond noir indiquent les polymorphismes mononucléotidiques non partagés par au moins des séquences archétypales Dans chaque marqueur, les sites sont délimités par un astérisque * indiquent les sites de délétion en comparaison avec la plus longue séquence de microsatellite Les données de séquence nucléotidique sont disponibles sur les numéros d’accès GenBank: EF-EF

Vue de la table largeGlobal de polymorphisme de longueur des marqueurs microsatellites polymorphes supplémentaires N, N et AA dans les isolats GUY – ABE, GUY – TER, GUY – TER, GUY – ANG et GUY – ANG Voir grandDownload slideGenescan analysis www.cnrs.fr www.inist.fr Lancer la recherche Polymorphisme de longueur des marqueurs microsatellites polymorphes supplémentaires N, N et AA dans les isolats GUY – ABE, GUY – TER, GUY – TER, GUY – ANG et GUY – ANG

Discussion

L’analyse génotypique avec des marqueurs microsatellites a révélé que seule la souche était responsable d’au moins des cas de toxoplasmose dans l’épidémie. C’est, à notre connaissance, la première fois qu’une telle preuve directe d’une toxoplasmose Le génotype atypique de cette souche ne peut pas être lié aux lignées principales connues et semble être lié à une toxoplasmose sévère acquise par des adultes immunocompétents en Guyane Ceci est en accord avec les caractéristiques cliniques inhabituelles de cette épidémie. , la plupart des patients adultes qui n’avaient pas d’immunodéficience présentaient un syndrome infectieux sévère avec une atteinte viscérale, en particulier pulmonaire et hépatique, entraînant la mort au cas où les patients présentaient une diversité de manifestations cliniques parmi les différents cas. pendant l’enquête dans le village, sans aucun symptôme potentiellement mortel ou besoin d’hos Pitalisation Étant donné que la souche identique a été isolée chez chaque patient, des hypothèses autres que la virulence de la souche doivent être envisagées, y compris un effet inoculum. De plus, même si les habitants appartenaient à la même famille, les décès La plupart des habitants de Patam étaient sensibles à T gondii, car la prévalence de la toxoplasmose dans ce village était très faible avant l’épidémie. Cependant, de nombreux facteurs de risque d’exposition à la toxoplasmose étaient présents dans le village. , comme un contact étroit et régulier avec le sol, la végétation et l’eau dans la forêt amazonienne entourant le village; la présence de chats sauvages ou d’autres félidés autour du village; le rapport sur les activités de chasse et la consommation occasionnelle de gibier; et l’utilisation des eaux de ruissellement ou des eaux usées Malheureusement, aucun de ces facteurs de risque n’a été formellement identifié comme étant la source de cette épidémie. Le nombre et la gravité des cas et l’interdiction religieuse sur la consommation de viande insuffisamment cuite suggèrent une contamination probable par les oocystes. ingestion de kyste tissulaire La survenue de cas ultérieurs chez le patient pourrait suggérer une source persistante de contamination dans l’environnement. Cependant, aucun nouveau cas n’a été signalé dans les mois suivant cette épidémie. Bien que l’eau n’ait pas été analysée, l’eau potable aurait pu être contaminée par des oocystes. chats sauvages ou félidés, parce qu’il a été recueilli de la pluie ou de l’eau de rivière et n’a pas été traité en Guyane française voisine, l’incidence de ces formes sévères d’infection primaire T gondii est élevée dans cette région de, habitants, avec & gt; Des cas bien documentés au cours de la dernière décennie MD, données non publiées Ces formes d’infection semblent être liées à un cycle forestier impliquant des félidés sauvages et leurs proies Des études récentes en Guyane soulignent cette hypothèse, indiquant une forte toxoplasmose la séroprévalence chez les mammifères sauvages non cannivores, tels que les pécaris Tayassu, pacas Agouti paca, armadillus Dasipus noviemcinctus et les cerfs Mazama, vivant dans une zone forestière inhabitée et considérés comme des espèces de gibier humaines majeures; Les mammifères terrestres étaient significativement plus fréquemment exposés à T gondii que les autres mammifères , ce qui concorde avec l’exposition orale liée au comportement des sols. Une souche de T gondii a été isolée d’un jaguar sauvage en Guyane française, mais aucune tentative d’isolement n’a été Ajzenberg et al ont révélé que la plupart des cas déclarés de toxoplasmose disséminée chez des patients immunocompétents en Guyane française présentaient des isolats génétiques atypiques de T. gondii. Ces isolats atypiques ne sont pas liés aux lignées principales I, II et III et ont de nombreux polymorphismes uniques à de nombreux marqueurs Allèle à Myosin-A marqueur a été trouvé uniquement dans les isolats provenant de l’Amérique du Sud Guyane française, le Brésil, et, maintenant, le Suriname parmi & gt; souches typées avec ces marqueurs microsatellites dans le Centre de ressources biologiques Toxoplasma DA, données non publiées; cette diversité génétique et ces caractères atypiques ont également été observés chez la souche T gondii isolée du jaguar sauvage en Guyane française avec l’allèle à TgM-A Des études complémentaires sont nécessaires pour mieux décrire ce cycle sylvatique de l’infection à T. gondii. Cette épidémie de toxoplasmose Une région amazonienne de forêt pluviale a été caractérisée par sa sévérité. Outre les aspects épidémiologiques et cliniques, nous rapportons des preuves moléculaires directes de l’épidémie en décrivant le profil génétique identique des isolats prélevés chez des patients. L’hypothèse probable de contamination pourrait être l’ingestion. d’oocystes, l’étude environnementale restait non-contributive Les médecins doivent être conscients de ces manifestations cliniques de toxoplasmose aiguë qui semblent être liées à un cycle forestier impliquant des félidés sauvages et leurs proies dans la forêt amazonienne

Remerciements

Nous remercions Stéphane Romand Laboratoire de Parasitologie de l’Institut de Puériculture de Paris pour l’analyse moléculaire environnementale et Anouk Gouvras pour l’amélioration de la langue anglaise de cet article. Soutien financier La Direction de la Santé et du Développement Social de la Guyane et le Ministère des Affaires Etrangères, Section de la coopération surinamaise française Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits